簡(jiǎn)介
酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法 ，簡(jiǎn)稱(chēng) 酶聯(lián)免疫法 ，或者 ELISA法 。
它的中心就是讓抗體與 酶復(fù)合物 結(jié)合，然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)。
步驟
ELISA用血清來(lái)檢測(cè)，首先血液要經(jīng)過(guò)至少半個(gè)小時(shí)的凝集，然后取 血清 。將酶復(fù)合物用稀釋液稀釋后，加血清及陰性、陽(yáng)性對(duì)照，還有就是質(zhì)控品（這是嚴(yán)格的要求，它的范圍必須在質(zhì)控范圍內(nèi)）。經(jīng)過(guò)一個(gè)小時(shí)的孵育，然后洗板，加 底物 ，半個(gè)小時(shí)避光反應(yīng)后加終止液即完成反應(yīng)部分，然后就是讀數(shù)。由數(shù)值來(lái)判斷結(jié)果的陰性或陽(yáng)性。
基本原理
?、偈箍乖蚩贵w結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其 免疫活性 。
?、谑箍乖蚩贵w與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來(lái)進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體
?、诿笜?biāo)記的抗原或抗體
?、勖缸饔玫牡孜铩８鶕?jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。
