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膠體金法
[ 更新時間:2014-05-08 ]
膠體金法
編輯
膠體金是由
氯金酸
(HAuCl4)在
還原劑
如
白磷
、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。
目錄
1
簡介
2
功能
1
簡介
編輯
免疫膠體金技術(shù)
的基本原理:
膠體金在
弱堿
環(huán)境下帶
負電荷
,可與蛋白質(zhì)分子的
正電荷
基團
形成牢固的結(jié)合,由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合,所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。 膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外,還可以與許多其它
生物大分子
結(jié)合,如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀,如高
電子密度
、顆粒大小、形狀及
顏色反應(yīng)
,加上結(jié)合物的免疫和生物學特性,因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學、
組織學
、病理學和細胞生物學等領(lǐng)域。 膠體
金標
記,實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面
負電荷
,與蛋白質(zhì)的正電荷
基團
因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從
氯金酸
制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、
毒素
、
糖蛋白
、酶、抗生素、激素、
牛血清白蛋白
多肽綴合物等非共價結(jié)合,因而在基礎(chǔ)研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。 免疫
金標
記技術(shù)(Immunogold labelling technique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結(jié)合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當這些
標記物
在相應(yīng)的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用于定性或
半定量
的快速免疫檢測方法中,這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。
2
功能
編輯
常用的免疫
膠體金檢測
技術(shù): (1)免疫膠體金光鏡染色法 細胞懸液涂片或組織切片,可用膠體
金標
記的抗體進行染色,也可在膠體金標記的基礎(chǔ)上,以銀顯影液增強標記,使被還原的銀原子沉積于已標記的金顆粒表面,可明顯增強膠體金標記的敏感性。 (2)
免疫膠體金
電鏡染色法 可用膠體
金標
記的抗體或抗抗體與
負染
病毒樣本或組織
超薄切片
結(jié)合,然后進行負染??捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。 斑點免疫金滲濾法 (3)應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作
載體
,先將抗原或抗體點于膜上,封閉后加待檢樣本,洗滌后用膠體
金標
記的抗體檢測相應(yīng)的抗原或抗體。 (4)膠體金免疫層析法 將
特異性
的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體
金標
記
試劑
(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過
毛細作用
向前移動,溶解結(jié)合墊上的膠體金標記試劑后相互反應(yīng),當移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時,待檢物與金標試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條,使用十分方便。
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